許多測試要求在無菌條件下進行.主要原因是:

一，確保作人員的安全

防止檢測出的病原菌因操作不當而造成個人污染.
1.無菌操作要求1.接種細菌時必須穿工作服，戴工作帽.
2.接種食品樣品時，必須穿專用工作服、帽子和拖鞋，放在無菌室緩沖室，工作前用紫外線消毒使用.
3.接種食品樣品時，進入無菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接種使用的吸管、平盤和培養基等必須消毒滅菌，打開未使用的盤子，放置后不能使用，金屬器具必須用高壓滅菌或95%的酒精燃燒3次后使用.
5.從包裝中取出吸管時，吸管的尖端不得接觸露出部位，使用吸管接觸試管或平盤時，吸管的尖端不得接觸試管或平盤的邊緣.
6.接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后，打開試管塞必須用火焰消毒.
7.接種環和針在接種細菌前用火焰燒毀所有金屬線，必要時燒毀環和針與棒的連接部，接種結核菌和烈性菌的接種環在沸水中煮沸5min，用火焰燒毀.8.吸管吸收菌液或樣品時，應使用相應的橡膠頭吸收，不得直接用口吸收.二.無菌之間的使用要求1.

無菌之間通向外部的窗戶必須是雙層玻璃，密封，無菌之間的大小不得隨意打開緩沖間和拉門，設置0.5-0.7m2的小窗戶，以備進入無菌之間傳遞物品.2.無菌之間應保持潔凈，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實驗無關的物品.3.在無菌之間使用前后關閉門，打開紫外線燈室內懸掛紫外線燈消毒時，需要30W紫外線燈，距離1.0m，照射時間在30min以上，使用紫外線燈時，請注意不要直接在紫外線下操作，以免損傷4.處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意進出.如果需要傳遞物品，可以在窗戶上傳遞.5.無菌之間需要設置空調時，需要過濾裝置.

二、消毒滅菌要求微生物檢測用玻璃器具

金屬器具和培養基、污染和接種的培養物等，必須滅菌后使用.

干熱和濕熱高壓蒸汽鍋的滅菌方法
1、滅菌前準備好的
(1)所有需要滅菌的東西都要先洗干凈，玻璃器具如吸管、平盤用紙包裝嚴密，用金屬筒打開上面的通氣孔.

(2)安裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好，注射器抽出管芯，用紗布包好.2.放置(1)干熱滅菌器:放置物品不能擠壓，也不能接觸箱子的四壁.

(2)大型高壓蒸汽鍋:放置滅菌物分別包裹，直接放入消毒筒內，物品之間不得擠壓.3.設備檢查(1)檢查門開關是否靈活，橡膠圈是否損壞，是否平整.

(2)檢查壓力表蒸汽排出時是否停留在零位置，關閉門和蓋子，蒸汽和加熱后，觀察空氣是否泄漏，壓力表和溫度計表示的情況是否一致，管道是否堵塞.

(3)對于有自動電子程序控制裝置的滅菌器，在使用前檢查規定的程序，是否符合滅菌處理的要求.4.滅菌處理(1)干熱滅菌法:該方法適用于干熱時不破損、不變質、不蒸發的物品、玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等滅菌.

①器械容器清洗后干燥，以免附著在表面的污垢炭化.

②滅菌時放置物品不要擠壓，不要直接接觸底部和箱壁，物品之間留有間隙.

③菌時關閉箱門，接通電源，首先打開排氣孔約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度上升到160℃調節指示燈，維持1.5?2小時.④滅菌結束后或溫度上升時，必須在60℃以下打開箱門.

2、手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用應按以下步驟進行:
①手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復使用時補充水量，水變混濁需要更換).

②手提式壓力鍋將頂蓋的排氣管插入消毒罐內壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用).

③蓋上蓋子擰緊，不漏氣的滅菌器放在火源上加熱，立式壓力鍋通過電源，打開頂蓋的排氣閥放入冷氣閥(水沸騰后排氣閥10-15min)的滅菌器.

③蓋子擰緊頂蓋子，不漏氣的滅氣的滅氣體壓力，放入火源，立即取消除壓力，立即取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

⑤取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

②夾層達到預定溫度后，打開鍋室進氣閥，將蒸汽引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出.

③鍋室達到規定的壓力和溫度時，調節吸氣閥，保持恒定④自然或人工冷卻到60℃后開門取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破.

⑤使用自動程序控制式壓力蒸汽滅菌器，放置物品關閉門后，根據物品類別按下相應的開關，按要求自動滅菌，滅菌時必須使用附屬儀表記錄溫度和時間，操作要求嚴格按照制造商的說明書進行.5.滅菌溫度和時間(1)干熱滅菌器滅菌溫度為160℃，為1.5-2h.(2)壓力蒸汽滅菌鍋的滅菌溫度和時間
(3)間歇性滅菌方法

1.滅菌方法
壓力不大的蒸汽進行滅菌，有些物質通過高壓蒸汽滅菌容易破壞，可以用這種方法滅菌.

(1)將想要滅菌的東西放入鍋中，蓋上蓋子，打開排水口，排出器內的馀水.

(2)關閉排水口，打開進氣門，必要時消毒10~20min.

(3)滅菌后關閉進氣門，取出物品冷卻到室溫，放入37℃的溫箱過夜，第二天用上述方法消毒，這樣3次就能達到滅菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培養基中含有血清和蛋的特殊成分，高熱會破壞營養成分，因此使用低溫，可以使血清凝固，達到滅菌目的:(1)使用該法滅菌的血清等分裝時，必須嚴格遵守無菌操作，試管、平盤也必須在滅菌后使用.

(2)根據要求將培養基變成斜面和上層，加入足夠的水后，連接電源，升溫75~90℃1h滅菌，放入37℃的溫箱過夜，這樣滅菌3次.3.沸騰消毒:用煮鍋或沸騰消毒器，水沸騰后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.02%的甲醛，80℃煮60min達到滅菌目的，但在選擇沸騰消毒的增加消劑時，必須注意對物品的腐蝕性.
4.滅菌處理:滅菌后的物品，根據正常情況無菌，從滅菌器中取出時，必須仔細檢查放置，以免再次污染.

取出(1)物品，立即檢查包裝的完整性，破壞或棉塞脫落時，不得作為無菌物品使用.

(2)取出的物品，如果包裝有明顯的浸水者，不得作為無菌物品使用.

(3)培養基或試劑等，必須檢查是否符合滅菌后的顏色或狀態，未達到的人應廢棄.

(4)啟閉式容器，取出時應關閉篩孔.

(5)取出的物品掉落在地面或錯誤地面，不潔凈的地面，不潔凈的液體，不能作為無塵物品使用的情況下).

三、有毒有菌污物處理要求微生物實驗所用實驗器材、

培養物等未經消毒處理，一律不得帶出實驗室.
1.培養的污染材料和廢棄物應放置在嚴密的容器和鐵絲筐中，集中保管在指定的場所，統一進行高壓滅菌.

2、經過微生物污染的培養物，必須經過121℃、30min高壓滅菌.
3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小時(消毒液不得低于浸泡高度)，經過121℃、30min高壓滅菌.
4.涂層染色清洗層的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的清洗液必須沖入杯子中，高壓滅菌后倒入下水道，染色的玻璃層浸入5%煤酚皂溶液中24小時后煮沸清洗.

做凝聚試驗用的玻璃或平盤，必須在高壓滅菌后清洗.5.破碎的培養物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液噴灑和浸泡污染部位，浸泡30分鐘后擦拭干凈.污染的工作服和強烈試驗穿的工作服、帽子、口罩等，必須放入專用的消毒袋中，用高壓滅菌后才能洗.

四、培養基制要求培養基制的質量直接影響微生物的生長.

由于各種微生物對營養的要求不完全相同，培養目的不同，各種培養基礎的準備要求如下:
1.根據培養基礎處方的成分量稱，溶于蒸餾水，使用前應對應用的試劑藥品進行質量檢查.
2.pH測定和調節:pH測定必須在培養基冷到室溫時進行.在熱或冷的情況下，pH有一定的不同，所以測定的情況下，在計算量中加入堿或酸混合后，再進行測試.培養基pH值必須正確.否則，會影響微生物的成長和結果的觀察.但是，由于高壓滅菌會影響培養基的PH的下降和上升，因此滅菌壓力過高或次數過多不能影響培養基的質量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調整PH后加入.
3.培養基礎應清晰，觀察細菌生長情況，培養基礎加熱煮沸后，可用脫脂棉或絨毛過濾，去除沉淀物，必要時可用蛋白清晰處理，使用的瓊脂棒應事先清洗干凈后使用，以免瓊脂中含有雜質影響透明度.
4.安裝培養基不得使用鐵、銅等容器.最好使用洗凈的中性硬質玻璃容器.

5.培養基的滅菌要達到完全滅菌的目的，注意不要因加熱而降低營養價值.一般來說，121℃、15min即可.主要原因是:第一，防止實驗操作中人為污染樣品.

五、確保工作人員的安全，

防止被檢測出的病原菌因操作不當而造成個人污染.
1.無菌操作要求
1.接種細菌時必須穿工作服，戴工作帽.
2.接種食品樣品時，必須穿專用工作服、帽子和拖鞋，放在無菌室緩沖室，工作前用紫外線消毒使用.
3.接種食品樣品時，進入無菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接種使用的吸管、平盤和培養基等必須消毒滅菌，打開未使用的盤子，放置后不能使用，金屬器具必須用高壓滅菌或95%的酒精燃燒3次后使用.
5.從包裝中取出吸管時，吸管的尖端不得接觸露出部位，使用吸管接觸試管或平盤時，吸管的尖端不得接觸試管或平盤的邊緣.
6.接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后，打開試管塞必須用火焰消毒.
7.接種環和針在接種細菌前用火焰燒毀所有金屬線，必要時燒毀環和針與棒的連接部，接種結核菌和烈性菌的接種環在沸水中煮沸5min，用火焰燒毀.
8.吸管吸收菌液或樣品時，應使用相應的橡膠頭吸收，不得直接用口吸收.二.無菌之間的使用要求
1.無菌之間通向外部的窗戶必須是雙層玻璃，密封，無菌之間的大小不得隨意打開緩沖間和拉門，設置0.5-0.7m2的小窗戶，以備進入無菌之間傳遞物品.
2.無菌之間應保持潔凈，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實驗無關的物品.3.在無菌之間使用前后關閉門，打開紫外線燈室內懸掛紫外線燈消毒時，需要30W紫外線燈，距離1.0m，照射時間在30min以上，使用紫外線燈時，請注意不要直接在紫外線下操作，以免損傷4.處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意進出.如果需要傳遞物品，可以在窗戶上傳遞.5.無菌之間需要設置空調時，需要過濾裝置.

六、消毒滅菌要求微生物檢測用玻璃器具、

金屬器具和培養基、污染和接種的培養物等，必須滅菌后使用.

(1)干熱和濕熱高壓蒸汽鍋的滅菌方法1.

滅菌前準備好的(1)所有需要滅菌的東西都要先洗干凈，玻璃器具如吸管、平盤用紙包裝嚴密，用金屬筒打開上面的通氣孔.

(2)安裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好，注射器抽出管芯，用紗布包好.2.放置(1)干熱滅菌器:放置物品不能擠壓，也不能接觸箱子的四壁.

(2)大型高壓蒸汽鍋:放置滅菌物分別包裹，直接放入消毒筒內，物品之間不得擠壓.3.設備檢查(1)檢查門開關是否靈活，橡膠圈是否損壞，是否平整.

(2)檢查壓力表蒸汽排出時是否停留在零位置，關閉門和蓋子，蒸汽和加熱后，觀察空氣是否泄漏，壓力表和溫度計表示的情況是否一致，管道是否堵塞.

(3)對于有自動電子程序控制裝置的滅菌器，在使用前檢查規定的程序，是否符合滅菌處理的要求.4.滅菌處理(1)干熱滅菌法:該方法適用于干熱時不破損、不變質、不蒸發的物品、玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等滅菌.

①器械容器清洗后干燥，以免附著在表面的污垢炭化.

②滅菌時放置物品不要擠壓，不要直接接觸底部和箱壁，物品之間留有間隙.

③菌時關閉箱門，接通電源，首先打開排氣孔約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度上升到160℃調節指示燈，維持1.5?2小時.④滅菌結束后或溫度上升時，必須在60℃以下打開箱門.

(2)手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用應按以下步驟進行:
①手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復使用時補充水量，水變混濁需要更換).

②手提式壓力鍋將頂蓋的排氣管插入消毒罐內壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用).

③蓋上蓋子擰緊，不漏氣的滅菌器放在火源上加熱，立式壓力鍋通過電源，打開頂蓋的排氣閥放入冷氣閥(水沸騰后排氣閥10-15min)的滅菌器.

③蓋子擰緊頂蓋子，不漏氣的滅氣的滅氣體壓力，放入火源，立即取消除壓力，立即取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

⑤取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

②夾層達到預定溫度后，打開鍋室進氣閥，將蒸汽引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出.

③鍋室達到規定的壓力和溫度時，調節吸氣閥，保持恒定④自然或人工冷卻到60℃后開門取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破.

⑤使用自動程序控制式壓力蒸汽滅菌器，放置物品關閉門后，根據物品類別按下相應的開關，按要求自動滅菌，滅菌時必須使用附屬儀表記錄溫度和時間，操作要求嚴格按照制造商的說明書進行.5.滅菌溫度和時間(1)干熱滅菌器滅菌溫度為160℃，為1.5-2h.(2)壓力蒸汽滅菌鍋的滅菌溫度和時間(2)間歇性滅菌方法1.滅菌方法1.滅菌方法系:壓力不大的蒸汽進行滅菌，有些物質通過高壓蒸汽滅菌容易破壞，可以用這種方法滅菌.

(1)將想要滅菌的東西放入鍋中，蓋上蓋子，打開排水口，排出器內的馀水.

(2)關閉排水口，打開進氣門，必要時消毒10~20min.

(3)滅菌后關閉進氣門，取出物品冷卻到室溫，放入37℃的溫箱過夜，第二天用上述方法消毒，這樣3次就能達到滅菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培養基中含有血清和蛋的特殊成分，高熱會破壞營養成分，因此使用低溫，可以使血清凝固，達到滅菌目的:(1)使用該法滅菌的血清等分裝時，必須嚴格遵守無菌操作，試管、平盤也必須在滅菌后使用.

(2)根據要求將培養基變成斜面和上層，加入足夠的水后，連接電源，升溫75~90℃1h滅菌，放入37℃的溫箱過夜，這樣滅菌3次.3.沸騰消毒:用煮鍋或沸騰消毒器，水沸騰后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.

02%的甲醛，80℃煮60min達到滅菌目的，但在選擇沸騰消毒的增加消劑時，必須注意對物品的腐蝕性.4.滅菌處理:滅菌后的物品，根據正常情況無菌，從滅菌器中取出時，必須仔細檢查放置，以免再次污染.

取出(1)物品，立即檢查包裝的完整性，破壞或棉塞脫落時，不得作為無菌物品使用.

(2)取出的物品，如果包裝有明顯的浸水者，不得作為無菌物品使用.

(3)培養基或試劑等，必須檢查是否符合滅菌后的顏色或狀態，未達到的人應廢棄.

(4)啟閉式容器，取出時應關閉篩孔.

(5)取出的物品掉落在地面或錯誤地面，不潔凈的地面，不潔凈的液體，不能作為無塵物品使用的情況下).

四、有毒有菌污物處理要求微生物實驗所用實驗器材
培養物等未經消毒處理，一律不得帶出實驗室.
1.培養的污染材料和廢棄物應放置在嚴密的容器和鐵絲筐中，集中保管在指定的場所，統一進行高壓滅菌.

2、經過微生物污染的培養物，必須經過121℃、30min高壓滅菌.3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小時(消毒液不得低于浸泡高度)，經過121℃、30min高壓滅菌.
4.涂層染色清洗層的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的清洗液必須沖入杯子中，高壓滅菌后倒入下水道，染色的玻璃層浸入5%煤酚皂溶液中24小時后煮沸清洗.

做凝聚試驗用的玻璃或平盤，必須在高壓滅菌后清洗.5.破碎的培養物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液噴灑和浸泡污染部位，浸泡30分鐘后擦拭干凈.

污染的工作服和強烈試驗穿的工作服、帽子、口罩等，必須放入專用的消毒袋中，用高壓滅菌后才能洗

七、培養基制要求培養基制的質量直接影響微生物的生長.

由于各種微生物對營養的要求不完全相同，培養目的不同，各種培養基礎的準備要求如下:
1.根據培養基礎處方的成分量稱，溶于蒸餾水，使用前應對應用的試劑藥品進行質量檢查.
2.pH測定和調節:pH測定必須在培養基冷到室溫時進行.在熱或冷的情況下，pH有一定的不同，所以測定的情況下，在計算量中加入堿或酸混合后，再進行測試.培養基pH值必須正確.